DNA提取试剂盒的操作方法

    全套操作约需1小时，分匀浆、细胞裂解、除蛋白、DNA纯化等步骤，详细说明如下。匀浆和细胞裂解:使用不同的实验材料需采用不同的匀浆步骤，具体说明如下：【从动物组织中提取基因组DNA】使用研钵进行匀浆时：

① 取1～100 mg的动物组织或人组织移入冰浴预冷的研钵中，快速用力展研成匀浆。注）下列组织请加液氮研磨至粉末状。A．富含DNA酶的胰脏、脾脏、胸腺、淋巴等组织。B．富含胶原蛋白的皮肤、肌腱等组织。C．富含角质蛋白的组织或坚硬的组织（如骨骼）等。

② 加入650 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1，温和研磨30秒钟。注）使用上述①-注）的实验材料时，请在加入Solution A及RNase A1后，将研钵置于65℃水浴上研磨1分钟。

③ 收集650 μl研磨好的组织匀浆液移至Collection Tube中。如果匀浆体积不足650 μl，请补充Solution A至650 μl，65℃保温5分钟。

使用研磨棒进行匀浆时:

① 取1～100 mg的动物组织或人组织移入冰浴预冷的Collection Tube 中，用研磨棒快速研磨成糊状。

② 加入350 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1后用研磨棒快速研磨成匀浆。

③ 加入350 μl的Solution A将研磨棒上的匀浆冲入Collection Tube中，充分振荡混合后，65℃保温5分钟。

【从植物材料或植物培养细胞中提取基因组DNA】

① 按下表称取适量的新鲜植物材料（如选用的是冷冻干燥植物材料，则用量减半），剪成小块放入研钵中，加入液氮，待样品冷冻后快速、用力研磨至粉末状。研磨时应间断加入液氮以防止材料融化。植物材料种类植物材料使用量*植物花、叶片10～100 mg植物茎60～240 mg植物根80～240 mg植物种子80～240 mg* 如选取植物的根、种子等样品时，因其基因组DNA含量很低，需使用超过表格中所示的参数用量，此时请分两管进行步骤1～6的实验操作，在步骤7的操作中再将各管溶液分次加入至同一Spin Column中过滤，使各管的基因组DNA结合到同一个Spin Column上。如从培养的植物细胞中提取基因组DNA，请离心收集2×103～1×107的培养植物细胞，加入150 μl水充分悬浮细胞后移入研钵中，加入液氮后快速、用力研磨至粉末状。注）样品研磨应充分，否则将会严重影响基因组DNA的收率。

② 将研钵移至65℃水浴，当样品粉末刚开始融化时，向研钵中加入700 μl的Solution A和1.2 μl的RNase A1，用力碾磨30秒。

③ 收集650 μl研磨好的组织匀浆移至Collection Tube中。如匀浆体积不足650 μl，请补充Solution A至650 μl。65℃保温15分钟。注）处理富含纤维的根/茎等植物材料或富含淀粉、蛋白质的种子等时，可延长水浴时间至60分钟。

【从全血中提取基因组DNA】

① 取10～250 μl的全血（含抗凝剂）加入至Collection Tube中。

② 加入500 μl的Solution A。

③ 加入1 μl的RNase A1，激烈振荡15秒钟后，冰浴5分钟。注） 人与动物的抗凝全血的一次处理量为≤250 μl；禽类、两栖类的抗凝全血的一次处理量为≤10 μl。

【从培养细胞中提取基因组DNA】三.使用悬浮培养的动物细胞时：

① 使用Collection Tube收集1×105～1.5×107的细胞悬浮液，5,000 rpm离心5分钟，弃上清（细胞培养液）。

② 加入150 μl的灭菌蒸馏水或PBS悬浮细胞。

③ 加入500 μl的Solution A和0.8 μl的RNase A1，激烈振荡15秒钟，然后室温静置1分钟。