T25瓶细胞处理的方法

收到细胞后，检查外包装是否完整，细胞培养瓶是否完好。 如有破损漏液等问题，请即时联系。

并进行以下操作：

 1. 75%酒精棉球擦拭T25细胞培养瓶外部。 

2. 将细胞放入37度培养箱中预温3-4小时后再做处理，以稳定细胞状态。

 3. 预热培养基（含10%胎牛血清，1%双抗）。

 4. 显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（40×,100×,200×各一张）。

 5. ①若细胞密度较小，无菌操作，去掉培养基。每瓶添加第四步中准备的5-6ml培养基。放到37度培养箱培养。待细胞密度达到80%以上，进行传代 

②若细胞密度较大，达到80%以上，将细胞传代培养。 注：培养瓶里的培养基血清浓度为5%，建议更换成自己配好的新鲜培养基。由于运输过程中的问题，细胞培养瓶中的贴壁细胞有可能从瓶壁中脱落下来，显微镜下观察会出现细胞悬浮的情况。 这时请在拍照后将悬浮的细胞即时离心，加15%血清的培养基到新的培养皿/瓶继续培养3天；同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的培养基。（这里是针对原来培养基FBS浓度是10%的情况，如果原来FBS浓度是20%，可以增加到25%FBS浓度）