试剂盒的检测原理中，为什么选择夹心法或双抗体夹心法

试剂盒的检测原理中，为什么选择夹心法或双抗体夹心法

在ELISA试剂盒中选择 夹心法（或双抗体夹心法） 作为检测原理的主要原因如下：

1. 高特异性

双位点结合：需要两种抗体（包被抗体和检测抗体）同时结合目标抗原的不同表位。只有当两种抗体均能特异性识别抗原时才会形成“夹心"复合物。

减少交叉反应：尤其当其中一种抗体为单克隆抗体时（如小鼠IL-27试剂盒），可显著降低非特异性结合的干扰。

2. 高灵敏度

信号放大作用：通过生物素-亲和素系统（如HRP标记链霉亲和素）或酶标二抗的多级放大效应（如TMB显色），可检出低至pg/mL级别的目标蛋白（如小鼠IL-27灵敏度达1.48 pg/mL）。线性范围广：例如人IL-27的检测范围为15.6–1000 pg/mL。

3. 适用于复杂样本

无需纯化抗原：即使样本中存在杂质（如血清中的其他蛋白），只要目标抗原具有至少两个结合位点即可被准确检出。

广泛适用性：适用于血清、血浆、细胞上清等多种样本类型。

4. 操作稳定性和重复性

标准化流程：预包被的固相抗体和标准化试剂（如冻干标准品）确保实验条件可控。

低变异系数：例如小鼠IL-27试剂的板内/板间变异系数均<10%。

5.与其他方法的对比优势

优于直接法：直接法需直接标记一抗且易受非特异信号干扰；而夹心法通过两步结合提高准确性。

优于竞争法：竞争法适用于小分子半抗原（如激素），而夹心法更适合大分子蛋白（如多表位的IL-27）。

总结

选择双抗夹心法的核心在于其高特异性与灵敏度的平衡以及对复杂样本的适应性。对于多亚基或大分子蛋白（如IL-27），该方法能确保准确量化目标物质浓度