细胞贴壁不牢？快速修复培养技巧分享

细胞贴壁不牢

一 、常见原因分析

消化过度

胰酶作用过久/浓度过高 ：破坏膜表面粘附蛋白 ，导致无法重新附着 。

吹打力度过大 ：机械损伤使胞外基质脱落。

环境因素

pH异常 （如NaHCO₃分解致pH过碱） ：影响整合素介导的粘附 。

血清/基质不足 ：缺乏纤维连接蛋白 、层粘连蛋白等粘附因子 。

其他问题

支原体污染 ：分泌毒素干扰代谢。

容器材质不适 ：玻璃瓶未包被时粘附率低于TC处理塑料瓶 。

二 、快速修复方案

（一 ）紧急处理步骤

轻柔离心重铺

-收集悬浮细 ，1000rpm离心5min后 ，用含20%血清的新鲜培养基重悬 ，接种至预包被的培养器皿中。

短期高血清支持

-换用含15%-20%血清的培养基（24小时后恢复常规浓度） ，促进粘附蛋白分泌 。

（二 ）长期优化措施

问题类型解决方案

消化控制-缩短胰酶作用时间（如293T仅需2分钟）

改用低浓度胰酶（0.05%-0.25%）

容器包被-多聚赖氨酸（0.1mg/ml包被30分钟）

明胶/鼠尾胶原预处理瓶底

环境调节-稳定CO₂浓度（5%）与温度（37℃±0.5）

检测并调整pH至7.2-7.4

污染排查-支原体检测（如PCR） ，污染则弃用并消毒

（三 ）特殊案例处理

HEK293/293T等难贴璧细胞:

采用无钙镁PBS漂洗后直接换液 ，减少扰动 。

三 、预防性建议

传代时保留部分旧培养基 （含自分泌粘附因子） ，与新培养基混合使用 。

复苏后首周使用高血清培养基 （20%） ，帮助恢复 。

通过上述方法 ，通常24-48小时内可显著改善粘附率 。若仍无效 ，建议更换新批次细胞株 。

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