ATCC细胞：冻存和复苏具体步骤解析

ATCC细胞种类繁多，涵盖超过1000种动物细胞系和7000种微生物菌种，涉及动物、植物、微生物等多个领域，是全球科学研究的重要资源。这些细胞系经过严格的质量控制和验证，包括形态学检查、遗传学分析和无污染检测，确保其可靠性和纯度。例如，ATCC提供的细胞系如RAW264.7、HEK293、Vero E6等，均通过了STR分析和污染检测，用于多种生物学研究。

ATCC细胞的冻存具体步骤：

选择对数生长期的健康细胞（此时增殖活跃），用胰酶消化贴壁细胞（悬浮细胞直接收集），离心（125g×10min）弃上清

配制含保护剂的冷冻液：无血清冷冻液（如货号C7001）

或

含10% DMSO +90% FBS/培养基

重悬细胞至密度为1×10⁶~5×10⁶ cells/mL

分装至标记好的冷冻管（含细胞名称/日期/代数），密封

程序降温：

方法：程控冷冻仪（-1°C/min）

替代方法：

先放于-80°C冰箱24小时（用聚苯乙烯盒隔热）

再转入液氮气相层长期保存（<-130°C）

ATCC细胞的复苏具体步骤：

提前准备：

预热培养基至37°C

调节CO₂培养箱条件（通常37°C,5% CO₂）

快速解：

从液氮取出冷冻管→立即浸入37°C水浴摇晃至冰晶融化（约1~2分钟）

去除DMSO：

转移细胞悬液至含9mL培养基的离心管

离心125g×10min弃上清（去残留DMSO）

重悬接种：

用新鲜培养基重悬细胞→接种至培养瓶

后续观察：

24小时后换液并评估贴壁/存活率

注：杂交瘤等敏感细**胞可能需要数天恢复

键注意事项：

全程无菌操作（酒精消毒冷冻管表面）

避免温度波动：

不可将细胞存放于-80°C超过24小时

解速必须快过临界温区（-5~0°C）

记录代数/状态：

ATTC细胞超过50代建议弃用

推荐使用10代细胞实验