培养优质原代细胞的几大因素

原代细胞的生存受多种因素影响，以下是一些关键要点：

合适的培养环境

培养基：是为原代细胞提供营养和维持生存的基础。不同类型的原代细胞对培养基的需求差异很大，如神经细胞通常需要含有特殊生长因子和营养成分的培养基，以支持其生长和分化；而皮肤成纤维细胞则可以在较为通用的 DMEM 培养基中良好生长。

温度：一般来说，来源于人体和哺乳动物的原代细胞最适培养温度为 37℃，这与体内环境温度一致。温度过高或过低都会影响细胞的代谢活动和生理功能，甚至导致细胞死亡。

气体环境：主要是氧气和二氧化碳。氧气是细胞进行有氧呼吸、产生能量的必要条件；二氧化碳对于维持培养基的 pH 值稳定至关重要。通常细胞培养需要在含 5% 二氧化碳的培养箱中进行，以保证培养基的 pH 值维持在 7.2-7.4 之间。

湿度：培养环境的湿度应保持在 95% 左右，以防止培养基中的水分蒸发，维持培养基的成分稳定和渗透压平衡。

细胞接种密度

原代细胞接种密度过低，细胞之间的相互作用减少，可能会影响细胞的增殖和存活；接种密度过高，细胞会过早地接触抑制，营养物质消耗过快，代谢废物积累过多，也不利于细胞的长期生存。如肝细胞原代培养时，合适的接种密度可能在每平方厘米 1×10⁴ - 5×10⁴个细胞。

底物和支架

许多原代细胞具有贴壁生长的特性，需要合适的底物来附着和铺展。细胞培养瓶或培养皿表面通常经过特殊处理，以增加细胞的贴壁能力。对于一些特殊细胞，还需要使用细胞外基质成分如胶原蛋白、纤连蛋白等进行包被，为细胞提供更接近体内的微环境，促进细胞的附着和生长。

避免污染

无菌操作：在原代细胞培养的整个过程中，必须严格遵守无菌操作原则。实验人员要穿戴无菌工作服、口罩、手套等，实验器材和培养基等都要经过严格的灭菌处理。

检测和预防：定期对细胞培养物进行微生物污染检测，包括细菌、真菌、支原体等。一旦发现污染，应立即采取措施，如丢弃受污染的细胞培养物，对培养环境和器材进行chedi消毒等。

生长因子和激素

许多原代细胞的生长和生存依赖于特定的生长因子和激素。如表皮生长因子（EGF）可以促进上皮细胞的增殖和分化；胰岛素样生长因子（IGF）对多种细胞的生长和代谢具有调节作用。在培养原代细胞时，需要根据细胞类型添加相应的生长因子和激素，以维持细胞的正常生理功能和生存。

原代细胞的生存需要在各个环节精心把控，为细胞提供最适宜的条件，才能保证细胞的正常生长和用于各种科学研究及应用。